作者：郝镯; 李楠; 张珊珊; 李吉平; 何洪彬; 孟...犬瘟热病毒横向流动试纸条技术n基因环介导等温扩增技术敏感性特异性
摘要：为了建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)的方法,试验采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合的方法,根据CDV N基因序列中同源性相对较高的保守区设计一套标有生物素(biotin)的特异性引物,结合异硫氰酸(FITC)荧光素标记的扩增产物,建立RT-LAMPLFD检测方法,对该方法的反应条件和反应体系进行优化,同时分析敏感性及特异性,最后检测临床应用情况。结果表明:试验成功构建CDV RT-LAMP-LFD方法,此方法的最佳反应条件为60℃反应60 min;最佳的反应体系为镁离子浓度12 mmol/L,甜菜碱浓度0. 2 mmol/L,Bst DNA聚合酶活性8 U,AMV酶活性5 U,外引物与环引物比例1∶2;最低检测下限为1×10~2个拷贝/m L,能够特异地检测出CDV的存在,犬细小病毒(CPV)等其他病毒均为阴性,可以检测出病犬口鼻腔黏液中的CDV。说明试验建立的CDV RT-LAMP-LFD检测方法特异性强,敏感性高,操作简单,可广泛应用。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
