作者：黄东东; 王好; 李改娟; 杜晓燕; 夏克力; ...锦鲤疱疹病毒orf56基因真核表达载体重组质粒克隆序列基因疫苗
摘要：为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ) ORF56基因的结构和序列特征,试验采用锦鲤尾鳍原代细胞增殖培养KHV-CJ,提取DNA,以其为模板经PCR扩增获得ORF56基因,将该基因克隆到PVAX表达载体上,构建重组质粒PVAX-ORF56,并体外表达重组质粒,对KHV-CJ ORF56基因序列与GenBank上已知的对应基因序列进行比对,应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF56基因的结构和功能。结果表明:成功克隆出KHV-CJ ORF56基因;双酶切鉴定显示,目的基因与PVAX表达载体连接;体外表达重组质粒可见绿色荧光;与GenBank上已知序列比对显示,同源性达到99. 9%;该基因序列信号肽切割部位最可能位于第26位的组氨酸和谷氨酸之间,没有跨膜区,最大疏水指数为2. 174,最小疏水指数为-0. 334,其抗原表位主要集中在第1~27,54~143,156~223,254~295位氨基酸。说明KHV-CJ ORF56基因是较好的抗原候选基因。
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