作者：李俊萱; 吴胜昔; 梁望旺; 李令臣; 鲁友铭...牛支原体p30蛋白原核表达镍柱纯化蛋白免疫印迹
摘要：为了实现牛支原体p30蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验根据GenBank发表的p30（登录号为AIA33998.1）基因序列,在不改变p30蛋白氨基酸序列的情况下优化基因序列,全基因合成p30基因,并将其克隆到pET28a（＋）载体中,构建的重组质粒pET28a（＋）-p30转化至BL21（DE3）工程菌中进行诱导表达,筛选重组菌pET28a（＋）-p30/BL21（DE3）诱导表达的最适诱导温度、诱导时间及IPTG诱导浓度,利用His-tag镍柱纯化p30重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明：当重组菌株pET28a（＋）-p30/BL21（DE3）诱导条件为37℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L、诱导4 h时,p30蛋白表达量最高;SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后p30蛋白达到了电泳纯,经Western-blot分析,目的蛋白具有抗原特异性,在36 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明成功实现了在大肠杆菌中高效表达牛支原体p30重组蛋白。
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