作者：马晓莉; 林彦星; 董建国; 刘燕玲; 刘清神...猪圆环病毒2型orf2基因vero细胞真核表达载体重组表达质粒间接免疫荧光试验
摘要：为了研究猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV-2）ORF2基因在Vero细胞中的表达情况,试验利用PCR方法将扩增的PCV-2 ORF2基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1（＋）上,构建重组表达质粒pcDNA-ORF2,测序后对4株毒株的ORF2基因进行核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性比较分析,并分别采用磷酸钙法和脂质体法将重组表达质粒pcDNA-ORF2导入哺乳动物Vero细胞内,通过间接免疫荧光试验验证重组表达质粒在Vero细胞中的表达情况。结果表明：PCR方法成功扩增出4株PCV-2毒株的ORF2基因;成功构建出重组表达质粒pcDNA-ORF2;4株毒株的ORF2基因核苷酸序列同源性在98.6%-99.1%之间,推导氨基酸序列的同源性在97.4%-98.7%之间;间接免疫荧光试验检测到Vero细胞内发出绿色荧光。说明重组表达质粒pcDNA-ORF2在Vero细胞中得到了正确表达。
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