定点突变阻止金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性

作者：代健 樊自尧 杨轩 张丽萌 陈战球 崔玉东金黄色葡萄球菌定点诱变原核表达溶血活性

摘要：金黄色葡萄球菌分泌的α-溶血素是导致肺炎的重要致病因子。为进一步研究金黄色葡萄球菌α-溶血素（α-hla）的分子致病机理以及对其进行免疫预防，对α-hla第35位氨基酸进行了定点突变。用聚合酶链式反应（PCR）技术，从S．aureus wood46株基因组中扩增出α-hla基因，再利用重叠延伸PCR技术，将第35位带正电荷的组氨酸（密码子为CAC）突变为非极性的亮氨酸（密码子为CTC）。hlaH35L基因测序结果显示第35位的组氨酸突变为亮氨酸，构建的重组表达质粒pET-28a-c（＋）／hla和pET-28α-c（＋）／hlaH35L在E．coli BL21（DE3）中得到表达，重组蛋白α-Hla及hlaH35L大小均为33．4kDa，α-Hla引起兔红细胞溶血，hlaH35L未引起兔红细胞溶血。成功表达并获得了失去溶血毒性的重组蛋白hlaH35L。

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