作者：贺俊斌; 林日辉; 龙寒; 巫佳; 蔡杏华; 杨...泌尿系结石酶草酸脱羧酶纯化乙二胺四乙酸二酐化学修饰吸附
摘要：为提高草酸脱羧酶（Oxdc）在预防治疗泌尿系结石症方面的稳定性和应用性能,采用乙二胺四乙酸二酐（EDTAD）对Oxdc进行化学修饰,并初步优化了修饰条件：当修饰反应时间为8 h、EDTAD/Oxdc的摩尔比为50：1、反应p H为7.0、反应温度为37℃时,修饰率为71.91%,酶活回收率为75.42%。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和超高效液相色谱-质谱（UPLC-MS）联用分析证明Oxdc和EDTAD共价结合成功。紫外-可见吸收光谱（UV）和圆二色性光谱（CD）分析结果表明,修饰后Oxdc的空间结构发生了一定程度的改变。同时,部分酶学性质研究表明,经EDTAD修饰后的Oxdc较游离的Oxdc,最适p H向碱性方向偏移了约1.5个单位,耐热性和耐胰蛋白酶酶解的能力均显著增强。此外,修饰后的Oxdc在草酸钙上的吸附量明显提高。结果说明修饰后的Oxdc的稳定性显著增强,应用性能有所改善。
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