作者：刘媛; 李学伍; 王丽; 谷雨; 王林建禽流感病毒鸡传染性支气管炎病毒新城疫病毒传染性法氏囊病毒rna病毒复合pcr
摘要：依据Gen Bank中注册的禽流感病毒（AIV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、新城疫病毒（NDV）和传染性法氏囊病毒（IBDV）基因组核苷酸序列,通过序列比对获得AIV、IBV、NDV、IBDV的相对保守序列。根据每种病毒的保守序列利用生物学软件分别设计3对特异性引物,4种病毒共设计12对引物,并对12对引物进行模拟筛选,获得匹配最佳的4对引物。对获得的最佳匹配引物进行单项PCR验证,优化复合PCR反应条件,确定最佳的退火温度、引物浓度和Taq DNA聚合酶使用量;经特异性、敏感性及简化PCR试验,最终建立了简易复合PCR检测方法。结果表明,建立的检测方法可同时扩增出4条大小与设计相符的特异性片段,即IBV（146 bp）、NDV（215 bp）、IBDV（345 bp）、AIV（435 bp）;建立的复合PCR方法具有较强的敏感性和特异性,能检测出100 pg AIV、IBV、IBDV的cDNA和100 fgNDV的cDNA;将三温热循环改进为二温热循环,即将退火和延伸过程合为一步（62℃）,大大缩短了反应时间。
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