作者：曲志博; 鞠春成; 刘家旭; 马计超; 周鑫; ...usp22sirna神经母细胞瘤细胞凋亡
摘要：国的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默泛素特异性肽酶22（ubiquitin specific protease22，USP22）对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响和作用机制。方法合成USP22 siRNA及阴性对照siRNA（control siRNA），用脂质体Lipofectamine 2000转染至人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞和SK-NSH细胞，且设立阴性对照组和实验组。通过Western blot法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测两组神经母细胞瘤细胞的USP22的蛋白表达和mRNA表达水平的变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测USP22 siRNA对两组神经母细胞瘤细胞的增殖抑制率。通过原位凋亡TUNEL法检测USP22 siRNA对两组神经母细胞瘤细胞凋亡情况。流式细胞仪定量检测USP22 siRNA对神经母细胞瘤细胞凋亡及细胞周期分布的影响。结果与设立的阴性对照组相比较，实验组中神经母细胞瘤细胞中USP22蛋白和mRNA表达显著下降（P〈0．05），神经母细胞瘤细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05），凋亡率随时间延长明显上升（P〈0．05），细胞周期中G2／M期的细胞比例明显增高。结论USP22基因在神经母细胞瘤细胞的增殖中发挥重要的作用，采用siRNA技术能够有效地沉默USP22基因的表达，并显著抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖，其机制可能与调节细胞周期及细胞凋亡相关。
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