作者：于晓旻; 朴海龙; 孙艳; 李金英; 钟敏乳腺肿瘤肝素结合细胞因子乳腺癌细胞上皮细胞间质化shrna干扰细胞迁移细胞侵袭
摘要：目的 探讨肝素结合细胞因子（Midkine）的表达对乳腺癌细胞的增殖和侵袭的作用.方法 采用慢病毒介导的shRNA干扰技术在乳腺癌细胞中沉默Midkine的表达,及利用慢病毒高表达Midkine基因在正常乳腺表皮细胞中.利用蛋白质印迹（Western blot）法检测shRNA干扰或高表达后的正常乳腺表皮细胞和乳腺癌细胞中Mid-kine蛋白的表达情况.利用流式细胞仪技术、Transwell小室实验、及细胞划痕实验,分析Midkine基因高低表达对正常乳腺表皮细胞和乳腺癌细胞生长、增殖、侵袭及转移的影响.结果 首先观察了不同乳腺癌细胞中Midkine的表达情况.其中Midkine只有在BT549、MDA-MB157和MDA-MB436间充质乳腺癌细胞（Mesenchymal cell）中表达,而正常细胞和上皮细胞乳腺癌细胞（Epithelial cell）中不表达.BT549细胞中两种不同shRNA降低Mdikine蛋白表达的效率分别达到100%和90%.HMLE正常乳腺上皮细胞中Midkine高表达效率非常高.结晶紫染色法检测细胞增殖实验结果显示,Midkine-shRNAs转染组BT549细胞的生长速度较阴性对照组降低（P〈0.01）.流式细胞仪检测结果显示,Midkine-shRNAs转染组BT549细胞的增殖指数为（36.06±2.12）%和（32.06±3.46）%,明显低于对照组53.06±3.68%.同时观察到EMT标识物B连环蛋白（β-catenin）、N钙粘蛋白（N-cadherin）在Midkine-shRNAs转染组BT549细胞中表达上调.Transwell小室实验显示两个Midkine-shRNA转染组BT549细胞迁移（Migration）细胞数为零和（7±4.4）个高/倍视野,它们的侵袭（Invasion）细胞数为（38±7）和（46±8）个/高倍视野,明显低于对照组的迁移（Migra-tion）细胞数（178±14）个/高倍视野,侵袭（Invasion）细胞数（232±35）个/高倍视野.同时也观察到高表达Midkine正常乳腺上皮细胞表现出间质化（EMT）的表型,EMT标识物E钙粘蛋白（E-cadherin）、连环蛋白（β-catenin）在Midkine高表达HMLE细胞中表达下调的现象.�
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