作者：蔡庆和; 陈先祥; 张征; 王江华; 车军akt2shrna胰腺癌细胞凋亡
摘要：目的：构建AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体，运用RNA干扰（RNAi）技术，观察其对人胰腺癌细胞SW1990和Capan2中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用，并探讨其增强肿瘤细胞对化疗药物敏感性，促进细胞凋亡的机制。方法：运用基因工程技术，设计合成针对AKT2 mRNA的特异性shRNA，构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体包裹转染人胰腺癌细胞SW1990和Capan2，荧光显微镜观察细胞内红色荧光蛋白的表达，计算转染效率，RT-PCR、Western Blot检测AKT2的表达及干扰效率，FACS检测细胞凋亡率来比较转染前后人胰腺癌细胞的抗凋亡能力。结果：①经双酶切及测序证实pAKT2-shRNA构建成功。②SW1990和Capan2细胞转染pAKT2-shRNA后，荧光显微镜下观察，发红色荧光的细胞占总细胞数的35％～40％；RT-PCR和Western Blot检测结果示，转染后AKT2 mRNA和蛋白表达显著降低。③FACS检测结果示，转染pAKT2-shRNA后，紫杉醇30 nM作用24h，与对照组相比，细胞凋亡率显著升高（P〈0．05）。结论：pAKT2-shRNA能有效抑制胰腺癌细胞AKT2基因表达，增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，促进肿瘤细胞凋亡。
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