作者：乔金柱; 麻楠; 孙天杰; 李姗; 王冬梅小麦原核表达抗体制备westernblotting
摘要：为深入研究小麦TaSnRK2.1在小麦-叶锈菌互作过程中的功能,PCR扩增TaSnRK2.1的开放阅读框(ORF)全长,对其进行生物信息学分析。结果表明,该基因开放阅读框全长为1029 bp,编码342个氨基酸,相对分子质量38.78 kDa,等电点为5.78。构建重组原核表达载体pColdⅡ-TaSnRK2.1,并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)。使用终浓度0.5 mmol/L IPTG诱导基因表达,并进行电泳检测。结果显示,诱导蛋白(包涵体)在约39 kDa处有明显条带,与预测蛋白分子量大小一致。利用Ni-NTA亲和层析纯化获得目的蛋白,并将之作为抗原制备兔源多克隆抗体。经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,抗体效价为1∶25600,采用Western-blotting检测分析该抗体的特异性,结果显示该多克隆抗体能够特异结合TaSnRK2.1。本试验为进一步研究TaSnRK2.1在小麦-叶锈菌互作过程中的功能奠定了基础。
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