作者:董伟欣 张月辰 张迎迎表达载体真核构建红色荧光蛋白
摘要:为获得红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)真核表达载体35S-pCl301-DsRED,利用PCR将瞬时表达载体PGDR上的全长DsRED扩增下来并用XbaI和BamHI酶切该片段,同时用相同的内切酶消化中间载体pBluescriptSK(+),连接两片段并测序,将鉴定正确的DsRED用相同的内切酶切下并导人双元载体35S-pCl301,利用基因枪将正确质粒转染洋葱内表皮细胞瞬时表达DsRED。结果表明:35S-pCl301-DsRED真核表达载体已成功构建并在荧光共聚焦显微镜下呈现红光,即获得了可产生红色荧光的35S-pCl301-DsRED载体,为今后植物目的基因定位提供了阳性对照,同时中间载体pBluescriptSK(+)-DsRED的构建为今后植物目的基因定位提供了实验工具。
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