作者：魏小勇差减cdna文库抑制性差减杂交铁皮石斛
摘要：[目的]探讨构建铁皮石斛抑制差减文库的方法,为克隆石斛碱生物合成相关功能基因奠定基础.[方法]采用抑制性差减杂交(SSH)技术,分别以4年生和1年生铁皮石斛叶片互补脱氧核糖核酸(cDNA)作为检测子(tester)与驱赶子(driver),将所获得差减cDN段克隆入质粒表达载体(PointTMXa-1 T-Vector),转化大肠杆菌JM109,聚合酶链反应(PCR)扩增鉴定插入片段.[结果]成功地构建了与石斛碱生物合成相关的差减cDNA文库,获得的正、反向差减文库分别含560、220个重组子;插入片段的平均大小为550bp.[结论]所构建的差减cDNA文库适合进一步克隆分析石斛碱相关功能基因研究.
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