作者：严会文; 苏敏; 高杰; 廖文萍; 闫丽丽; 黄...绿色荧光蛋白pax6基因表达载体真核脂质体转染
摘要：目的：构建携带绿色荧光蛋白（GFP）报告基因及PAX6基因的重组真核表达载体,观察其在人胚肾细胞（293FT）细胞中的表达。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）从大鼠脑组织中获取PAX6基因,经连接T载体测序验证正确后,与真核表达载体p EF1α-IRES-Ac GFP经Sal I/Bam HI双酶切后;经T4 DNA连接酶连接,获得重组质粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP,用菌液PCR、Sal I/Bam HI双酶切及测序鉴定正确后,用脂质体法转染293FT细胞,采用倒置荧光显微镜观察GFP的表达、蛋白印迹（Western blot）法检测PAX6蛋白表达。结果：重组质粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP经RT-PCR和双酶切均得到大小为1 269 bp的目的条带,测序鉴定该序列与Gen Bank中大鼠PAX6基因序列的同源性达100%,插入基因的大小和方向正确;重组质粒转染293FT细胞后可见GFP绿色荧光,Western blot显示PAX6蛋白表达。结论：成功构建了PAX6真核表达重组质粒p EF1α-PAX6-IRES-Ac GFP,能在293FT细胞中表达PAX6蛋白。
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