作者：陈腾祥; 霍建云; 王宁; 王金利; 王晋星一...钙激活中性蛋白酶焦点黏附激酶细胞密度细胞培养蛋白水解产物
摘要：目的：探讨细胞培养密度对乳腺癌MCF7细胞钙激活中性蛋白酶2（calpain 2）和焦点黏附蛋白（FAK）的水解及活性的影响.方法：常规培养乳腺癌细胞MCF7,分别以1×10^6、5×10^6、1×10^7个细胞传代于不同的6 cm皿中,培养36 h后,形成不同的培养密度（分别为低密度、正常密度和高密度）,裂解细胞,提取蛋白行Western blot检测calpain 2和FAK的表达,用磷酸化抗体检测FAK的Y397位点磷酸化水平;MCF7细胞高密度培养并calpain 2抑制剂处理后,用Western blot法检测FAK水解情况和磷酸化水平.结果：不同密度培养对calpain 2的表达没有明显影响,但可影响calpain 2的水解,培养密度加大,水解程度加强;培养密度也可以影响FAK的水解模式,低密度培养细胞的FAK以较大的水解片段为主,高密度培养的FAK则以较小片段为主,高密度培养细胞FAK Y397磷酸化水平比低密度的低;给予calpain 2特异性抑制剂后,高密度培养细胞FAK大片段增多,小片段减少,其Y397位点的磷酸化水平增高.结论：细胞高密度培养可使MCF7细胞calpain 2的活性增强,FAK的水解程度加大,降低FAK的磷酸化.
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