作者:唐佳艳; 洪阳; 向敏; 郑洋; 主艳; 胡晓霞...肝癌细胞钙激活中性蛋白酶细胞迁移印迹法蛋白质
摘要:目的:观察不同转移能力肝癌细胞中钙激活中性蛋白酶(calpain)的表达情况,利用抑制剂抑制cal-pain活性,评价calpain对肝癌细胞迁移能力的影响。方法:用蛋白质印迹(Western blotting)检测不同转移能力肝癌细胞或肝细胞中calpain-1、calpain-2和Src的表达和酶解情况;用划痕法观察calpain-2抑制剂对高转移性肝癌细胞(MHCC97-H)迁移能力的影响。结果:Western blot结果显示,不同肝细胞系中calpain-1、calpain-2及Src的表达水平和剪切成为低分子量(LMW)活性形式的程度不一样,其中calpain-2和Src的表达与肝癌细胞的迁移能力有相关性,calpain-2抑制剂明显下调MHCC97-H细胞中calpain-2和Src的表达,减少其被剪切的程度;划痕实验结果显示,calpain-2抑制剂能明显减少MHCC97-H细胞向划痕区域迁移,而且抑制剂浓度越大,细胞迁移能力被抑制的程度就越重。结论:calpain-2的表达上调和活性增强可通过激活Src增加肝癌细胞的迁移能力。
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