作者:柯霞; 汪宁宁; 鲁阳辉; 胡忠策氧化葡糖杆菌米格列醇山梨醇脱氢酶甘油适应性驯化
摘要:氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)来源的山梨醇脱氢酶可催化N-羟乙基葡萄糖胺合成6-脱氧-15-氨基(N-羟乙基)-α-L-呋喃山梨糖,即合成降血糖药物米格列醇的关键中间体。本文采用适应性驯化策略,以甘油为唯一碳源,通过40g/L、60g/L、80g/L和100g/L甘油梯度连续传代培养,筛选获得了一株以甘油为碳源的高活力菌株G.oxydans A-3-D,扫描电镜结果表明该细胞表面褶皱较原始菌株有显著增加。在80g/L甘油培养基摇瓶培养24h后,菌体浓度为4.58g DCW/L,山梨醇脱氢酶的发酵体积酶活与比酶活分别为原始菌株G.oxydans ZJB-605的1.3倍及1.5倍。此外,在摇瓶培养条件下对影响催化反应进程的关键因素进行了考查,结果表明在摇瓶体系中,G.oxydans A-3-D的最适催化反应条件为80.0g/L底物、2.0g DCW/L菌体细胞、20mmol/L Mg^2+浓度,15℃反应48h后底物转化率达到90.8%,6NSL累积浓度为72.6g/L,较G.oxydans ZJB-605有显著提升。
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