作者：严寒静; 李磊; 张宏意; 何梦玲广藿香聚乙二醇原生质体制备原生质体融合新品种选育
摘要：为建立高效稳定的广藿香原生质体培养与融合技术体系,该研究以广藿香愈伤组织悬浮细胞为材料,研究了原生质体制备的酶解条件和培养方法、细胞密度、激素种类和浓度等因素对原生质体培养的影响,并通过测定融合产物直径确立融合细胞筛选范围,进一步研究聚乙二醇浓度、细胞密度、融合时间及融合液加入量等因素对原生质体融合的影响。结果表明:制备原生质体的适宜条件为pH5.8,酶解温度25℃;原生质体培养以铵盐减半的MS 1培养基进行海藻酸钠包埋、激素选用0.2 mg·L-1 NAA、2.0 mg·L-1 6-BA,培养密度2.0×10 5个·mL-1、蔗糖添加量1.0%、酸水解酪蛋白500 mg·L-1的条件下原生质体分裂频率、植板率均较高,且开始分裂时间和细胞团形成时间都较短;双细胞融合产物筛选范围为69.33~87.35μm;以40%PEG 6000化学促融30 min、加入0.5倍体积的融合液、细胞密度2.0×10 5个·mL-1的条件进行原生质体融合,聚合率可达57.19%;获得的融合产物经海藻酸钠包埋培育2个月后可观察到再生愈伤组织。
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