表达海肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型质粒的构建及鉴定

作者：王慧; 武帅钦; 陈阳; 钟照华; 赵文然; 佟...柯萨奇病毒b组3型海肾荧光素酶基因重组

摘要：目的 构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3,CVB3）,以实现定量检测CVB3.方法 将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达,扩增重组病毒并测定重组病毒株毒力.结果 成功构建2个重组病毒质粒,转染HeLa细胞,表达海肾荧光素酶（humanizedform of Renilla Luc,hRLuc）、荧火虫荧光素酶（firefly luciferase,Luc）的pCVB3-hRLuc和pCVB3-Luc转染后第1代均可检测到hRLuc和Luc活性,但只有pCVB3-hRLuc转染细胞有明显细胞病变.扩增和纯化的CVB3-hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性.扩增的CVB3-Luc没有观察到明显的细胞病变,且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性.用HeLa细胞经空斑形成试验进行毒力测定,CVB3-hRLuc的毒力为1.4（107 pfu/ml）.结论 成功构建了表达hRLuc的重组CVB3毒株CVB3-hRLuc,为定量研究CVB3感染打下基础.

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