LHBs与C53蛋白在肝癌细胞系HepG2中的共定位及结合区域研究

作者：张锦前; 池频频; 任娜; 李贵; 吴淑玲; 温...乙型肝炎表面抗原大蛋白c53hepg2共定位结合区域

摘要：目的研究肝癌细胞系HepG2中乙型肝炎表面抗原大蛋白（hepatitis B virus large surface protein，LHBs）与C53蛋白是否存在共定位，查明LHBs与C53蛋白的结合区域。方法分别构建pEGFP-C1·LHBs和pDsRedl-N1·C53质粒，共同转染肝癌细胞系HepG2，激光共聚焦观察它们在细胞内的共定位。构建质粒pCDNA-3．1（-）myc／his-LHBs和pCMV-5a-C53，并将C53基因截短构建质粒pCMV-5a-C53N、pCMV-5a-C1、pCMV-5a-C2和pCMV．5a-C3，将pCDNA-3．1（-）myc／his．LHBs和pc-MV-5a-C53及各截短质粒共转染HepG2细胞，免疫共沉淀方法验证LHBs结合的C53区域。结果成功构建pEGFP-C1-LHBs、pDsRedl-N1-C53、pCDNA-3．1（-）myc／his-LHBs、pCMV-5a-C53、pCMV-5a-C53N、pCMV-5a-C1、pCMV-5a-C2和pCMV-5a-C3质粒；用激光共聚焦的方法证实了LHBs与C53在HepG2细胞内存在共定位；免疫共沉淀方法证实了在HepG2细胞内LHBs与C53的结合区域为其c1区。结论LHBs与C53在肝癌细胞系HepG2内存在明确的相互作用，但仍需做进一步的功能研究。

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