作者：陈结慧; 祝胜郎; 叶玲; 朱恒梅; 蒋莹; 李...足细胞自噬凋亡糖尿病肾病
摘要：目的：探讨蛋白质非酶糖基化终产物（AGEs）作用下人足细胞自噬和凋亡发生情况及可能的信号转导通路。方法：体外培养永生化人足细胞,以AGEs 100 mg/L分别不同时间（0、4、8、12、24 h）刺激足细胞。Western blotting检测足细胞自噬标记性蛋白微管相关蛋白1B轻链3-II/I（LC3-II/I）、自噬相关基因Atg5、哺乳动物雷帕霉素靶点受体（m TOR）信号通路相关蛋白p70 S6激酶1（p-p70 S6 Kinase,p70 S6Kinase）表达水平;荧光显微镜观察自噬溶酶体形成标志蛋白溶酶体膜蛋白（LAMP2a）;AnnexinⅤ/7-AAD双染流式细胞术检测足细胞早期和晚期凋亡。结果：（1）与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足细胞LC3BII/I表达水平在4、8、12、24 h均明显下降（P〈0.05）;Atg5蛋白表达水平在8、12、24 h均明显下降（P〈0.05）,在12 h下降达到最高峰;p-p70 S6 Kinase水平在4、8、12 h升高（P〈0.05）,在12 h达峰,在24 h再次下降;（2）免疫荧光染色结果显示,与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激足细胞12 h LAMP2a表达明显减少;（3）与0 h相比,100 mg/L AGEs刺激后足细胞发生早期凋亡＋晚期凋亡比例在4、8、12、24 h逐渐增加（P〈0.05）,在12 h达峰（14.07%）。结论：AGEs刺激下人足细胞自噬减少,凋亡增加,伴随着m TOR/p70S6 Kinase信号通路激活。AGEs可能通过m TOR/p70 S6 Kinase信号通路途径调节足细胞自噬与凋亡,从而导致足细胞损伤。
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