作者：赖桂华; 余磊; 张黎声; 欧阳钧; 邱小忠id2基因c2c12细胞转染真核表达载体大鼠
摘要：目的：构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体，并观察外源性Id2基因C2C12细胞中的表达。方法：RT-PCR扩增出Id2全长cDNA，T4DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2cDNA进行连接，构建克隆载体，经限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体，构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2，经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDN段大小和序列的正确性；通过电穿孔转染法将外源性Id2基因导入C2C12成肌细胞中。分别于转染4、8、12、24、36、72h后通过荧光倒置显微镜下观察细胞整体情况，并计算转染效率。结果：经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向I（12cDN段，获得高转染率和高表达外源性Id2基因的C2C12细胞，转染8h时，转染效率约为（10．5±2．8）％；转染12h后，转染效率约为（20．9±3．1）％；转染24h后，转染效率最高，约为（60．8±3．2）％。结论：成功构建了同时携带有G418筛选位点和Id2基因的真核表达载体；并获得高表达外源性Id2基因的C2C12细胞。
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