作者：王峰; 田晶; 薛金凤; 赵霏; 宋柳江; 谭孟...腺相关病毒动脉粥样硬化对氧磷酶1内皮祖细胞
摘要：目的：构建带有人对氧磷酶1（hPONI）基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体，并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞（EPCs）后hPON1的表达。方法：提取流产胎儿肝脏的总RNA，RT-PCR获得cDNA，设计引物通过PCR获得PON!基因片段，将其与pGEM—TEasy载体连接，将PON1基因片段切下，插入到质粒pAAV—IRES—GFP的多克隆位点，获得质粒pAAV—PON1-IRES—GFP，经酶切和测序鉴定。包装的病毒rAAV—PON1用斑点杂交检测滴度，并用其转染EPCs检测hPON1在mRNA水平的表达。结果：pAAV—PON1-IRES-GFP酶切和测序结果完全正确。斑点杂交检测病毒的滴度为1．7×10^10g／mL，RT—PCR结果显示病毒转染EPCs后存在hPON1的表达。结论：成功构建了pAAV—PON1-IRES—GFP质粒，包装出较高滴度的rAAV—PON1，并且转染EPCs后可以检测到hPON1表达。
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