作者:刘利东; 朱蔚云; 黄金水; 李冰细胞融合ttrna聚合酶t7启动子荧光素酶报告系统
摘要:目的:建立T7RNA聚合酶/T7启动子载体系统,作为观察细胞融合是否成功的报导系统。方法:设计并合成引物从BL21细菌中扩增T7RNA聚合酶序列,并将其克隆进入真核表达载体pRc/CMV2中,作为RNA聚合酶的供体。T7RNA聚合酶特异性识别的r17启动子人工合成,构建于荧光素酶的表达载体pGL3中,利用其荧光素酶基因作为报导基因。两质粒共转染A549细胞和VeroE6细胞,检测荧光素酶的表达。结果:共转染pRc/CMV2。T7RNAP和pGL3-T7的A549细胞和VeroE6细胞的荧光强度分别为57745±7747和43679±8616,转染质粒pGL3-T7的细胞空白对照荧光强度1034±201和1091±157,分别与空白对照组比较差异有统计学意义(P〈0.01)。结论:成功构建了T7RNA聚合酶/T7启动子载体的细胞融合报导系统,可应用于细胞融合的相关实验研究中。
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