作者:王玮; 黄琨; 杨卫云; 赵莹雪; 肖保林; 洪...辣根过氧化物酶氢供体邻苯二酚苯胺酶活测定
摘要:对邻苯二酚-苯胺和苯酚-氨基安替吡啉构成的两组测定HRP酶活性的体系进行了研究和比较。紫外可见光光谱和高效液相色谱分析表明,在HRP催化过程中,邻苯二酚-苯胺氢供体对会生成为一种粉红色产物,该产物最大吸收波长在510咖,可用于HRP的活性测量。且与常规使用的苯酚-氨基安替吡啉氢供体对的情况相比,具有更高的灵敏度、更低的检测限值和很好的重复性,在对HRP分别进行20次酶活测量,所得相对标准偏差仅为2.9%。使用邻苯二酚-苯胺氢供体对的方法可计算得到酶动力学参数Km(12.5mM)和Vmax(12.2mMmin^-1mg^-1)。
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