作者：刘琳; 伍婧茹; 张文军dna型egs核糖核酸酶pul97基因人巨细胞病毒抗病毒
摘要：目的研究DNA型外部引导序列对人巨细胞病毒（HCMV）UL97基因的靶向抑制作用及抗病毒作用。方法借助计算机软件（RNAStructure4.5）模拟HCMV UL97 RNA的结构,选择二级结构相对简单且具备核糖核酸酶P（RNase P）底物一级结构序列特征的位点作为候选切割靶位,针对不同靶位设计并合成的DNA型EGS。将各EGS分别与体外转录的HCMV UL97 RNA及纯化的人RNase P体外混合,初步筛选具备靶向引导切割活性的EGS。进一步将体外有效的EGS转入HCMV感染的人胚肺成纤维细胞（HELF）,通过Western与Northern印迹法检测EGS在宿主细胞内对靶基因表达的影响。此外,通过空斑试验测定病毒的生长曲线,测定EGS对病毒复制的影响。结果本文设计并合成了针对HCMV UL97基因6个不同靶位的DNA型EGS（EGS_（168）、EGS_（212）、EGS_（313）、EGS_（663）、EGS_（1580）和EGS_（1664））。体外切割试验证实,EGS_（212）、EGS_（313）、EGS_（663）和EGS_（1580）具有明显的靶向引导切割作用。在HCMV感染的宿主细胞中,EGS_（212）和EGS_（1580）均能够沉默病毒UL97基因的表达,并显著抑制病毒的复制,分别使病毒滴度降低高达约300倍和600倍。结论本研究成功获得两种具有抗HCMV潜力的DNA型EGS,为进一步研发新型抗HCMV核酸类药物奠定了基础。
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