作者：吴文如; 李薇; 赖小平; 吴业剑; 梁倩影诃子简单序列重复区间反应体系
摘要：目的建立和优化药用植物诃子的ISSR-PCR反应体系。方法以诃子叶片为实验材料，采用CTAB法提取诃子DNA为模板，通过单因素和双因素实验，研究诃子ISSR-PCR反应体系中DNA模板、TaqDNA聚合酶、Mg^2＋、引物、dNTPs等的用量，以及退火温度对扩增结果的影响。结果建立了适合诃子ISSR分析的反应体系和扩增程序，即在50μL体系中含有1×PCR Buffer、DNA模板50～100ng、TaqDNA聚合酶3U、Mg^2＋2mmol／L、引物0．8mmol／L、dNTPs0．3mmol／L。扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性30S，根据不同引物的退火温度复性30s，72℃延伸1．5min，共35个循环；最后72℃延伸5min；反应结束后，4℃保存。同时筛选出9条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。结论这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行诃子鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础。
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