作者：张兆洲; 戴恩来; 杨静; 薛国忠; 张杰大鼠肾小球足细胞原代培养足细胞裂孔膜蛋白
摘要：目的建立一种操作相对简单、重复性较好的大鼠肾小球足细胞原代培养及鉴定的方法。方法取Sd乳鼠,无菌取肾,运用低浓度酶消化法、差异过筛法收集肾小球,将获得的肾小球种植于鼠尾胶原包被的25 Cm2细胞培养瓶中,置于37℃、5%Co2恒温恒湿培养箱中孵育。通过倒置显微镜和扫描电镜观察足细胞形态,采用免疫组织化学法检测WilmS瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)的表达以鉴定足细胞。结果种植第4天,可见大部分肾小球已贴壁,第5天见有细胞从贴壁的肾小球中爬出,第9天见约80%的细胞呈铺路石样融合生长。将种植后第9天的细胞消化传代培养,扫描电镜观察可见扁大而平、有树枝状突出的星形细胞。免疫组化结果显示足细胞标志蛋白nephrin和WT-1表达阳性,表明所培养的细胞为足细胞。结论本实验成功建立了一种操作简便、重复性较好的大鼠肾小球足细胞的分离、培养和鉴定方法,为进一步研究足细胞相关性肾脏疾病奠定了基础;WT-1和nephrin可作为足细胞鉴定的标记蛋白。
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