作者：杨志芳; 赵太云; 吴宁; 李锦i1型咪唑啉受体相互作用细胞外调节蛋白激酶
摘要：目的在细胞水平研究I1咪唑啉受体（I1R）对α2A肾上腺素能受体（α2AAR）表达及功能的影响。方法在完成小鼠I1R基因和α2AAR基因的质粒测序及酶切鉴定后,分别转染CHO细胞,采用放射性配体-受体结合实验、流式细胞分选技术进行阳性细胞单克隆筛选,建立分别稳定表达I1R和α2AAR的CHO细胞系,以及共同稳定表达I1R与α2AAR的CHO细胞系。采用放射性配体-受体结合实验确定α2AAR的亲和力及表达量,用Western印迹法研究I1R对α2AAR表达量的影响和对α2AAR激动剂右美托咪定刺激细胞外调节蛋白激酶（ERK）磷酸化作用的影响。结果在转染小鼠I1R和α2AAR基因质粒后,CHO细胞生长正常。在为稳定表达小鼠α2AAR的CHO细胞膜蛋白所做的放射性配体饱和实验中,3H-RX821002的Kd和Bmax值分别为（0.96±0.24）nmol/L和（0.29±0.03）nmol/g蛋白。在稳定表达小鼠I1R的CHO细胞以及稳定表达小鼠α2AAR的CHO细胞中再分别转染I1R基因后,I1R蛋白表达水平均明显上升（P〈0.05,P〈0.01）。在共同稳定转染I1R和α2AAR的CHO细胞系中,I1R的表达上调了CHO细胞中α2AAR的表达水平（P〈0.01）,同时也进一步上调了右美托咪定激活α2AAR引起的ERK磷酸化水平（P〈0.01）。结论在外源表达的细胞系中,I1R上调α2AAR蛋白的表达和右美托咪定激活α2AAR后的ERK磷酸化水平。本研究为后续分子水平深入探索I1R和α2AAR之间的相互作用奠定了基础。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
