作者:Carey; K; Westwood; N; Mitchison; T; ...小分子方法刚地弓形虫入侵机制细胞毒性宿主细胞
摘要:Carey等进行了以高通量显微镜为基础的实验,共筛选了12160种结构不同的小分子以研究刚地弓形虫的入侵抑制因子。(1)入侵实验:将含有待测小分子的培养液与单层非洲绿猴肾上皮细胞(BS-C-1细胞)t昆合,随之加入能表达黄色荧光蛋白的弓形虫,培养后用与Alexa546(分子探针)结合的抗弓形虫抗体mAbll—132或羊抗鼠IgG产生的mAbll—132标记胞外弓形虫;抗体培养后将细胞洗涤,固定,成像,鉴定红色和绿色荧光物质的数量。(2)细胞毒性实验:将弓形虫和BS-C-1细胞在一定条件下共同培养,用LIVE/DEAD哺乳动物细胞生存/细胞毒性实验或发光细胞生存实验测定细胞的生存能力,小分子分析用液相MS或NMR色谱法。
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