作者:郭云云; 张英汉; 耿建国sap基因克隆原核表达多克隆抗体
摘要:目的 制备小鼠SAP多克隆抗体,为进一步研究其功能和探讨其与炎症、肿瘤等疾病的相关性提供素材。方法 PCR扩增小鼠SAP基因编码区的DN段,将其重组人原核表达质粒PET30α(+),转化入大肠杆菌BL21中,异丙基β-D硫代办乳糖苷(IPTG)诱导产生His/mSAP融合蛋白,SDS-PAGE分析结果表明,蛋白主要以包涵体形式存在。采用割胶回收的方法纯化目的蛋白,免疫新西兰白兔,制备抗血清。通过ELISA、Western印迹来检测扰血清效价及特异性。结果 成功的构建了PET30α(+)/mSAP重组质粒,表达融合蛋白,免疫家兔所获得的mSAP多克隆抗体。结论 mSAP多克隆抗体特异性强。效价高。
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