LV-calb2和LV-siRNA-calb2慢病毒载体的构建及其在睾丸间质细胞的表达

作者：徐文丹 代晓南 朱倩 张蓓 高超 高莉 刘嘉...钙结合蛋白维生素d依赖性慢病毒属睾丸莱迪希细胞雄激素类

摘要：目的：构建钙视网膜蛋白（CALB2）基因超表达及小干扰RNA（siRNA）慢病毒载体,观察CALB2对睾丸间质细胞雄激素合成的调节作用。方法：合成超表达及干涉的质粒,转入制备好的细菌感受态细胞,聚合酶链反应（PCR）鉴定阳性重组子后测序验证,确认构建成功的超表达及干涉慢病毒载体。用上述慢病毒载体分别感染MLTC-1及R2C间质细胞,观察感染效率,而后用放射免疫法检测睾酮和孕酮的合成。结果：PCR和基因测序证实LV-calb2和LV-si RNA-calb2慢病毒载体构建成功,并可高效感染MLTC-1及R2C细胞。超表达CALB2后,MLTC-1细胞睾酮生成显著增加（P〈0.001）;干涉CALB2表达后,R2C间质细胞孕酮生成显著减少（P〈0.05）。结论：成功构建了calb2基因超表达及干涉慢病毒载体,并可体外转染睾丸间质细胞系。初步结果表明,CALB2可促进间质细胞类固醇激素生成。

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