单基因遗传性疾病的胚胎种植前遗传学诊断

作者：加拿大 孔德汶胚胎植入前遗传学诊断dna限制性内切酶pcr过程中的位点丢失聚合酶链反应

摘要：因在绝大多数的单基因遗传性疾病（SGD）中基因突变是异质性的,所以对大多数SGD病例行胚胎种植前遗传学诊断（SGD-PGD）时都需个别设计。为此,设计就成为SGD-PGD的重要一环。由于SGD的遗传模式（常染色体显性和隐性,性染色体连锁显性和隐性）和突变种类（点突变,大小片段插入和丢失,重复顺序数超常等）不同,应有相应的不同设计技巧和策略。笔者通过设计实例,向读者介绍了不同的设计技巧和策略。现今SGD-PGD的最基本实验室操作还是用聚合酶链反应（PCR）把单细胞（卵裂细胞）靶DN段扩增,然后诊断扩增后所得片段。设计最重要的一步就是对PCR所用引物的设计。设计还应包括单细胞PCR的特殊操作规定,DNA限制性内切酶酶切点设计（因在点突变时,常需用限制性酶内切后片段长度多态性分析方法作诊断）做诊断结果分析预估,确定最后一轮PCR的两个引物之一为荧光标记引物。成功的SGD-PGD工作需要有权威性的领导核心组织,协调,对团队的统管和支持,这也是成批地开展SGD-PGD的先决条件。而且,只有在遗传流行病学工作者、各医院儿科、各专门疾病研究所和分子生物学基因诊断科室的密切配合下,才能对多种SGD全面开展SGD-PGD。

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