作者：昔奋攻; 李宁; 吴常信大肠杆菌肥胖基因cdna序列原核表达载体重组蛋白pcr方法生物学活性脂肪含量基因编码扩增片段质粒转化温度诱导蛋白表达菌体蛋白小白鼠瘦蛋白信号肽ccg密码子ccc分子量表达量纯化造血
摘要：肥胖基因编码的瘦蛋白可以反映机体脂肪含量信息,在发育、繁殖、造血及体重调节等方面具有重要功能.本文利用PCR方法扩增去除信号肽的人肥胖基因cDNA序列,并将位于基因5'端的CCC转变为大肠杆菌常用密码子CCG,扩增片段经测序证实后,克隆原核表达载体pT7-7,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经温度诱导,SDS-PAGE电泳可见分子量约为16kD的特异蛋白表达带,表达量最高占菌体蛋白总含量的45%以上.表达重组蛋白经纯化,注射昆明白小白鼠,小白鼠体重明显下降,说明纯化的重组蛋白具有生物学活性.
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