作者：颜学勤; 王莹莹; 嵩钰佳; 王鑫; 陈思佳; ...人乳头瘤病毒16型e7蛋白抗血清
摘要：目的建立人乳头瘤病毒(human papillomavims,HPV)16型E7蛋白的原核表达系统,表达HPv16E7蛋白,制备小鼠抗HPV16E7血清。方法采用PCR方法扩增HPV16E7基因,构建人pET21b质粒,重组表达载体经鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。诱导表达后经十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和westemblot鉴定表达产物。提取包涵体进行变性复性处理后纯化,纯化后的可溶性蛋白免疫Balb/C小鼠,检测小鼠体内γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平、CD4/CD8比值和抗血清滴度变化。结果PcR扩增片段为0.3Kb,酶切和序列测定证实重组质粒构建正确。SDS—PAGE在11KD处出现蛋白条带。蛋白表达以包涵体为主。免疫后小鼠抗体效价升高,CD4/CD8比值无升高,IFN-γ无反应。结论成功制备可溶性HPV16E7蛋白和小鼠抗HPvl6E7高效价抗血清。
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