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标本保存液残留量对人乳头瘤病毒基因分型检测的影响

作者:袁继辉; 钟政荣; 龙璐; 耿朝晖; 梅虹; 郭...标本保存液hpv基因分型检测信号值和检出率

摘要:目的 观察人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)检测核酸提取过程中,弃上清液后标本保存液残留量对HPV基因分型检测结果的影响。 方法 采用流式荧光技术检测生殖道泌尿道分泌物HPV基因分型,根据弃上清液后标本保存液残留量分为4组:5 μL、20 μL、40 μL、80 μL组,进行扩增检测后再将上述5 μL组的10个样本的剩余DNA提取液再一分为二:一组加标本保存液80 μL(保存液组),一组加纯水80 μL(纯水组),进行扩增、杂交和检测,通过基因检测信号值和检出率以及电泳来评估标本保存液残留量对检测结果的影响。 结果 在HPV核酸提取过程中,弃上清液后HPV标本保存液残留量20 μL与5 μL组相比,内参和靶基因的检测信号值和检出率无差异( P 〉0.05);标本保存液残留量40 μL和80 μL组与5 μL组相比,靶基因的检测信号值和检出率均有显著差异( P =0.0138, P =0.0001);此外,纯水组,内参和靶基因的检测信号值均大于150,检出率100%,而加标本保存液组的检出率0%,两组的检测信号值和检出率有显著差异(靶基因 P = 0.0011 ,内参基因 P 〈0.0001)。 结论 在HPV核酸提取过程中,弃上清液后标本保存液残留量对HPV基因分型检测结果影响较大,标本保存液可抑制PCR的扩增而影响检测结果导致假阴性,残留量在20 μL以下才能保证检测结果的准确性。

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国际检验医学

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