作者：刘祎婷; 张艳; 黄菊; 于海静; 刘明; 万舰prdx1质粒载体转染
摘要：目的构建含有过氧化物氧化还原酶1（Prdx1）基因的pMSCV重组质粒,转染至人气道上皮细胞内,并进行鉴定,为进一步研究Prdx1在细胞内的功能奠定基础。方法构建Prdx1-pMSCV质粒,将Prdx1mRNA编码区序列克隆至pMSCV载体上,测序验证后大量提取,转染至BEAS-2B细胞内,细胞内可高表达Prdx1蛋白,收集总mRNA和蛋白裂解液分别进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Prdx1-mRNA和蛋白质印迹（Western blot）检测Prdx1蛋白变化。观察质粒转染后细胞内Prdx1高表达。结果重组质粒经限制性内切酶EcoRⅠ和BglⅡ双酶切及测序鉴定均证实Prdx1基因已正确克隆到pMSCV质粒载体中。Western blot结果进一步证实Prdx1-pMSCV重组质粒构建正确。结论本研究正确构建了Prdx1-pMSCV质粒。
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