作者：吴剑锋 夏永祥链球菌科抑制消减杂交毒力基因基因消减文库
摘要：目的构建化脓性链球菌毒力基因文库，克隆和筛选化脓性链球菌高毒力株特异表达基因。方法采用抑制消减杂交方法，以从患者体内分离的链球菌作为毒力菌株，分离毒力基因，将其与PMDl8-T载体进行T／A连接构建文库，将连接产物转化感受态大肠杆菌TOP10进行文库扩增后，将转化菌液涂布于LB固体平板，构建化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库，用斑点杂交初步筛选后，将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析。结果酶切产物为100～2000bp，连接效率大于50％，成功构建了化脓性链球菌毒力基因消减文库，所得阳性克隆经斑点杂交筛选后测序，与Genebank数据库进行同源性比对。5个未知序列可能为新基因，7个与已知基因有高度的同源性。结论用抑制消减杂交技术及T／A克隆技术成功构建了化脓性链球菌毒力基因文库；5个未知的新序列可能与化脓性链球菌的高毒力有关。
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