作者：董思文; 肖霞; 齐建利; 雷晓波; 王健伟肠道病毒71型病毒复制domaincontaining1
摘要：目的探讨PEF1(penta-EF-hand domain containing 1)对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)复制和感染的影响。方法采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)方法,敲低人恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma,RD)中PEF1的表达,通过RT-PCR、蛋白免疫印迹(western blot,WB)实验检测siRNA的效率。通过RT-PCR、WB和空斑实验检测并比较对照细胞和PEF1敲低细胞中EV71的复制水平。利用免疫荧光检测EV71感染后PEF1在细胞中的定位。采用CRISPR-Cas9技术构建PEF1敲除的RD细胞系,并通过测序和WB实验验证敲除效果,同时使用WB实验检测PEF1敲除的细胞中EV71的复制。结果siRNA能够显著降低RD细胞中PEF1的表达。EV71在PEF1敲低的细胞中的复制水平低于对照细胞。EV71感染后细胞内PEF1的表达水平并未发生改变,但是在细胞内的定位发生了改变。PEF1敲除细胞中EV71的复制水平也显著降低。结论敲低或敲除PEF1的表达能抑制EV71的复制,EV71感染并不影响PEF1的表达但改变其在细胞内的定位。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
