作者：刘志平 沙翔垠 王智崇 庄菁人角膜内皮细胞端粒酶端粒酶催化亚基增殖组织工程角膜
摘要：目的探索转染人端粒酶催化亚单位（TERT）促进人角膜内皮细胞（HCECs）增殖并进行长期培养的可行性。方法原代HCECs生长到80%融合时,采用脂质体介导的方法将质粒p EGFP-N1和p BABE-puroh TERT转染到HCECs,1μg/m L嘌呤霉素筛选。RT-PCR和Western blot检测嘌呤霉素耐药克隆中TERT的表达情况。阳性克隆进行传代培养。MTT法和细胞周期检测比较细胞的生长增殖能力;透射电镜检测细胞的超微结构,RT-PCR检测泵功能相关基因的表达,Western blot检测Na^＋/K^＋-ATPaseα1的表达,免疫荧光检测ZO-1、N-cadherin的表达。结果 TERT-HCECs表达了外源的TERT已经传到36代,保持了正常的HCECs形态且比HCECs具有更强的增殖能力;泵功能相关基因、Na^＋/K^＋ATPaseα1、ZO-1的表达在TERT-HCECs和HCECs中差异无统计学意义。TERT-HCECs能形成单层结构,并保持与原代HCECs细胞相似的泵功能。结论通过转染TERT,建立了一株与原代生理功能相近且具有更强增殖能力的TERT-HCECs。
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