作者：张宁 许继德 元刚 陈洁 陈旻湖 邢象斌胃癌细胞株opcml基因甲基化
摘要：目的探讨OPCML基因在胃癌细胞株中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系，并分析OPCML对胃癌细胞增殖的影响。方法（1）实验组为胃癌细胞株（SGC7901、AGS、MKN28、MKN45、N87、KATOⅢ和SNU1），对照组为正常胃组织，分别采用RT—PcR检测两组细胞OPCMLmRNA的表达。（2）用亚硫酸盐修饰正常胃组织的DNA和胃癌细胞MKN45的DNA，分别采用甲基化特异性PCR法检测OPCML基因启动子区甲基化情况。（3）实验组为药物处理组，即5-氮胞苷（5-AZA）去甲基化处理胃癌细胞MKN45，对照组为未经药物处理的MKN45，分别采用RT—PCR检测OPCMLmRNA的表达变化。（4）RT—PCR检测转染OPCML表达载体及pcDNA3．1空载体后mRNA的表达情况。（5）实验组为OPCML表达载体转染胃癌细胞AGS，对照组为空载体转染胃癌细胞AGS，使用浓度为0．5mg／mL的新霉素（G418）对转染细胞进行筛选，观察0PCML对胃癌细胞AGS集落形成的影响。结果（1）在胃癌细胞株中OPCMLmRNA的表达率显著低于正常胃组织。（2）胃癌细胞AGS和MKN45的甲基化程度明显高于正常胃组织。（3）5-AZA处理MKN45细胞后，OPCML表达上调。（4）OPCML表达载体转染HEK293A、AGS、MKN45细胞后，RT—PCR检测显示OPCML高表达。（5）外源性表达OPCML可抑制胃癌细胞AGS的集落形成率。结论OPCML基因作为肿瘤抑制基因，在胃癌细胞中的表达下调。OPCML表达下调与该基因启动子区甲基化密切相关。药物性去甲基化处理能够恢复OPCML的表达。在表达沉默的AGs细胞中外源性表达OPCML，抑制集落形成率。
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