作者：陈嵘祎; 阿彩岭; 李南; 潘紫凤; 蔡川川; ...病毒载体igfbp7恶性黑素瘤
摘要：目的构建靶向IGFBP7的LV5病毒表达载体,并检测其表达效能及在黑素瘤细胞系中促凋亡的作用。方法以人igfbp7基因序列作为模版合成编码核酸序列,通过限制性内切酶NotⅠ和NsiⅠ酶切、T4 DNA连接酶连接,将igfbp7插入LV5-GFP,构建靶向IGFBP7的慢病毒质粒表达载体,筛选阳性克隆后与包装质粒通过脂质体共转染SK-MEL-28人黑素瘤细胞株,对照组转染LV5空载体。病毒感染SK-MEL-28,采用荧光显微镜观察感染的效率,Realtime PCR检测igfbp7m RNA的表达,流式细胞术检测对照组及处理组细胞凋亡率。统计数据分析LV5-NC-IGFBP7促黑素瘤凋亡的效9能。结果成功构建LV5-NC-IGFBP7,病毒转染后测定其滴度为1x10 UT/m L,细胞感染率在80%以上,Realtime PCR检测表明处理组igfbp7 m RNA表达高于对照组（P〈0.01）,但对照组及处理组凋亡率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论靶向IGFBP7的LV5-NC-IGFBP7病毒载体能有效促进igfbp7 m RNA高表达,但促恶性黑素瘤凋亡的效能有待提高。
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