作者：林贯川人gpr177蛋白hgpr177pcdna3a549肺癌细胞蛋白表达
摘要：目的构建hGPR177/PCDNA3.1（＋）重组质粒,并在A549肺癌细胞中表达hGPR177蛋白。方法利用生物分析软件DNAMAN6.0选取合适的穿梭载体PCDNA3.1（＋）和酶切位点。用质粒提取试剂盒对穿梭载体PCDNA3.1（＋）及含有hGPR177基因pReceive-B04质粒进行抽提,并对其进行双酶切。使用DNA连接酶把hGPR177基因与PCDNA3.1（＋）酶切片段连接,重新构建hGPR177/PCDNA3.1（＋）重组质粒。将重组质粒通过电转的方式转导进A549肺癌细胞。运用细胞培养技术,培养已电转hGPR177/PCDNA3.1（＋）重组质粒的A549肺癌细胞。结果利用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测hGPR177/PCDNA3.1（＋）重组质粒的质量为6999bp。经过机械破碎后获取细胞提取物,电泳鉴定出现GPR177蛋白带。结论成功构建了hGPR177/PCDNA3.1（＋）重组质粒,并在A549肺癌细胞表达系统中表达出人GPR177蛋白。
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