作者：王开芳; 燕丽萍; 任飞; 赵登超; 孙超; 刘...正交设计引物筛选
摘要：为了确定毛梾SSR-PCR最佳的反应体系,本研究采用L16(45)正交设计试验方法对毛梾SSR-PCR反应体系的各影响因素进行了优化筛选,利用改良CTAB法提取毛梾叶片基因组DNA为模板,对模板DNA、dNTPs、Mg^2+、引物、Taq DNA聚合酶5个因素的用量进行了4个水平的优化筛选试验。结果显示,适用于毛梾的SSR-PCR最佳反应体系为:总体系20μL,dNTPs浓度0.25 mmol/L,Mg^2+浓度1.25 mmol/L,模板DNA用量为75 ng,Taq DNA聚合酶1 U/20μL,引物浓度为0.5 mmol/L。利用优化后的反应体系对毛梾SSR引物进行筛选,可从34对引物中筛选出9对具有多态性的SSR引物,进一步验证了毛梾SSR-PCR反应体系具有较好的稳定性和可重复性。本研究为毛梾的种质资源分析、分子标记辅助育种、遗传多样性分析等方面的进一步研究提供了技术支持。
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