作者：杜乐山; 谷思; 张盾; 任梦云; 臧春鑫; 关...正交试验单因素试验体系优化
摘要：为建立椭圆叶花锚ISSR-PCR最佳反应体系,本研究采用正交设计和单因素试验的方法,对影响ISSR-PCR反应体系的5种关键因素(DNA,dNTPs,引物,Mg^2+,Taq DNA酶)进行最适浓度筛选,并采用甘肃省的3个居群进行验证。结果表明,各因素影响大小依次为:DNA浓度>Mg^2+>dNTPs>Taq DNA酶>引物浓度。椭圆叶花锚ISSR-PCR反应的最佳体系为(25μL):50 ng DNA模板,Mg^2+2.0 mmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,Taq酶1.5 U,引物0.4μmol/L,2.5μL 10×Buffer。选取甘肃省3个居群进行验证,结果显示扩增条带清晰明亮且重复性好,表明该反应体系适用于椭圆叶花锚的ISSR分子标记。该反应体系的建立可为椭圆叶花锚ISSR标记开发、遗传多样性、遗传图谱构建等后续分析提供参考。
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