作者：陈洪举; 张浩; 高乐; 何鹏; 韦家少; 吴炳...巴西橡胶树地上部和地下部酵母双杂交cdna文库均一化
摘要：缺磷是影响橡胶树产量的主要因素之一,蛋白泛素化在其中发挥了重要作用。为研究泛素化在橡胶树低磷胁迫中的调控作用,本研究分别以巴西橡胶树“热研7-33-97”组培苗地上部和地下部为材料,构建酵母双杂交文库,并对其进行了评价。首先用CTAB法大量提取橡胶树地上部和地下部总RNA,再用PROMEGA试剂盒处理获得纯化的m RNA,然后采用SMART誖技术和LD-PCR合成双链c DNA(ds-c DNA),继而通过双链特异性核酸酶(DSN)对ds-c DNA进行均一化处理,再经CHROMA SPIN+TE-400柱子纯化长片段的c DNA,最后将获得的长片段c DNA和线性化载体p GADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞,构建均一化酵母双杂交文库。结果显示:地上部文库滴度8×107cfu/m L,插入片段≥0.5 kb的重组率为100%;地下部文库滴度7×107cfu/m L,插入片段≥0.5 kb的重组率为87%。该结果表明文库已成功构建,可以用于进一步实验。
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