作者：武星彤; 文亚峰; 韩文军; 周宏; 徐刚标杉木微卫星基因分型荧光标记多重pcr
摘要：荧光标记通用引物基因分型技术以其经济、实用的特点在微卫星标记研究中得到了较多应用。但传统以M13为通用引物的方法存在非特异性扩增条带多、基因分型质量差等问题。为加快微卫星基因分型新技术的推广和应用,提高林木分子遗传学研究水平,本研究参照Blacket等的方法,并结合微卫星多重PCR(multiplex PCR)技术,成功建立了杉木(Cunninghamia lanceolata)荧光标记通用引物多重PCR微卫星基因分型技术体系。新方法的关键在于应用了4个具有较高退火温度的通用引物和QIAGEN誖Multiplex PCR试剂盒,它们能有效减少非特异性扩增条带的产生,多重PCR体系的优化简单、快捷。通常只需调整通用引物的浓度和PCR产物稀释倍数,就能获得清晰、稳定的基因分型结果。研究表明,新方法不仅大幅度降低了实验成本,而且显著提高了微卫星基因分型效率。利用该技术实现了杉木EST-SSR标记位点的规模化开发,并开展了杉木种子园育种材料遗传多样性研究。本研究新技术的建立和应用可为杉木分子遗传学研究提供技术保障,也对其他物种的相关研究具有重要的参考价值。
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