作者：谢运海; 夏德安; 姜静; 林萍pcr反应体系水曲柳设计优化issr标记技术minitabtaq酶最佳反应体系模板dna标准化程序正交设计dntp优化试验统计软件退火温度优化系统地理变异水平mol引物果用
摘要：利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因素的最佳水平,建立水曲柳ISSR-PCR反应的最佳体系(20μl)为:Taq酶1.0U,Mg2+2.0mmol/L,模板DNA 50～200ng,dNTP 0.15mmol/L,引物0.3μmol/L.最后,对水曲柳ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为58.3℃.这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术,研究水曲柳的地理变异提供一个标准化程序.
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