作者：李蓉; 王燕; 陈国亮; 王小刚; 郑建斌金属螯合亲和色谱保留行为蛋白质竞争剂
摘要：以细胞色素C和溶菌酶为代表,研究了蛋白质在强亲和性金属螯合柱（IDA-Cu（Ⅱ））上的保留行为。考察了竞争剂、缓冲体系对蛋白质在IDA-Cu（Ⅱ）柱上保留值的影响。发现在PBS和NaAc-HAc缓冲体系用咪唑（Imid）和甘氨酸（Gly）作竞争剂,可使蛋白质得到较好分离;在Gly和Imid竞争体系,分别研究了pH值变化对蛋白质在IDA-Cu（Ⅱ）柱上保留值的影响。为使蛋白质在IDA-Cu（Ⅱ）柱上得到有效分离且减少固定金属Cu2＋的流失,对Gly体系,最好采用竞争置换和降低pH值相结合的方式进行洗脱。对Imid体系,溶液pH值应控制在6.0为宜,低pH值下蛋白质则不宜被洗脱。结果表明,竞争剂浓度与蛋白质在IDA-Cu（Ⅱ）柱上的保留关系均符合计量置换模型。随着竞争剂浓度的增加,蛋白质的保留值减小。保留因子（k′）的对数与竞争剂浓度倒数（1/[D]）的对数具有良好的线性关系,其线性相关系数分别在0.984和0.986以上。
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