作者：黄河清; 陆永进; 林庆梅; 卓慧钦; 黄慧英海兔多肽内切酶质谱分析吸引素胰岛素
摘要：选择DEAE62纤维素和SephadexG-150为分离介质，采用柱层析法分离纯化海兔卵多肽酶（En-dopeptidease 0f Aplysia egg，AEE）。选用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法测定AEE纯度和亚基分子量（约39 kDa）。基质辅助激光解吸／电离（MALDI-TOF）质谱技术测定AEE由单类型亚基（M）组成，其m/z值分别为12738．17、18108．79和38221．42，即分子式为[M^3＋]、[M^2＋]和[M^＋]。其中AEE分子量为38221．42Da（称为AEE39），是一种含金属锌的多肽酶。以胰岛素（INS）为探针，研究AEE39酶切INS能力，其酶切产物m/z比值为1449．51、2085．84、4080．41和4165．42。自行设计INS序列分析软件，鉴定AEE39酶切INS的位点，发现易酶切位点是Leu-X（氨基酸残基），其次是Glu-X，部分Phen-X、Asn-X和Ser-X结构也可以发生酶切。通过INS和海兔吸引素的分子结构比对后，指出海兔卵中的AEE。主要功能之一是负责酶切海兔吸引素，起着海兔之间信息交往、召唤、识别和交配的重要作用。AEE39具有酶切酸性多肽（acidicpep-tide，AP）中Leu-Leu的能力，属于一种广谱性多肽内切酶。
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